ELISA检测样品的处理方法

首先应保证样本不含NaN₃（叠氮钠），因为NaN₃会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。为了保证检测的准确性，保存于-20℃的样本最好在1~6个月内检测；保存于-80℃的样本最好在一年内检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。

1、血清

用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。4℃ 3000rpm离心5~-10分钟，仔细收集上清。建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测的不准确性。

2、血浆

用含抗凝剂的采血管或离心管（EDTA、肝素钠和枸橼酸钠）采集血液标本，标本采集后60min内4℃ 3000rpm离心5~10分钟，取上清即血浆。将上清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。

3、细胞培养上清

取细胞培养上清到离心管，3000rpm离心5~10分钟，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

4、细胞裂解液

①.吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。

②.收集细胞悬液，3000rpm离心5~10分钟，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。

③.加入适量的预冷PBS重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。

④.将样品放入液氮中或-80℃冰箱，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。

⑤.3000rpm离心5-10分钟，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

5、组织匀浆液

1）将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。

2）将组织块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分

3）将组织按一定的比例加入预冷的PBS（临用前加入蛋白酶抑制剂）匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。（通常按组织重量：PBS体积=1:9的比例匀浆，例如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数）

4）吸取匀浆液到离心管，4℃ 10000rpm 离心5~10 min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

6、尿液、唾液、胸腹水、脑脊液等其他体液样本

用干净容器收集尿液/唾液/胸腹水，4℃、3000 rpm/min离心5~10 min，收集上清。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（较长时间），避免反复冻融。

总的来说，因为ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，所以应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。

7、粪便标本收集、处理、保存方法

采集时用干净的竹签挑取粪便样本到离心管中，向离心管中加入适量PBS缓冲液（0.01M，PH 7.4），搅拌均匀（通常按粪便重量：PBS体积=1:9的比例匀浆，例如1g的粪便样本对应9ml的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数）。然后4℃、10000 rpm/min离心10 min，小心收集上清。置于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

8、植物标本收集、处理、保存方法

取适量大小组织块（一般0.2－0.5 g），用预冷的PBS缓冲液（0.01M，PH 7.4）漂洗三次，滤纸拭干水分。准确称重，放入匀浆管中，加入9倍体积的匀浆介质（0.05 mol/L Tris-HCl，pH 7.4 PBS缓冲液）于匀浆管中，冰水浴条件下，剪碎组织块，手工匀浆或机器匀浆，制成匀浆液。4℃、10000 rpm/min离心10 min，取上清。置于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

9、牛奶

10000rpm离心10分钟，牛奶会分成三层，收集中层乳清部分，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

如果客户样本是牛奶样本，请务必告知客户ELISA检测只能检测乳清部分，并不是检测全乳，避免后续产生不必要的售后问题。