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在基础实验中，抗原抗体结合反应是我们很常运用的一个原理，像免疫组化、免疫荧光、免疫印迹试验（Western Blot）、ELISA等都是常见又很重要的几种实验。而实验的关键步骤，就在于抗体的选择。抗体选择不好，实验结果可能不尽如人意。
所以，抗体的挑选这一步骤至关重要，本篇文章，就和大家聊聊如何挑选抗体和一些小Tips
一、明确实验的目的
首先明确自己实验的目的是什么，根据自己的实验目的选择相应的实验方法和抗体，对于实验的来讲，往往会起到事半功倍的效果。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB、IHC、ICC、ELISA、FCM分析等。如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证。为了避免实验风险，当说明书中没有提及的应用方法时，可向商家申请测试装，进行测试后，再决定是否购买。
01:WB
WB的蛋白经过加热变性之后都变成线性的结构。因此好的抗体是采用非常特异序列的人工合成多肽的方法来做实验，结果也非常特异。
02:IP/CHIP
我们用抗体去结合生理状态下的蛋白质，因此IP的抗体使用纯化的天然蛋白制作的抗体来做，也可以用纯化的重组蛋白的抗体。不要用人工合成多肽制作的抗体，因为这种抗体识别的位点可能被深深地藏在了蛋白的内心深处。CHIP和IP没有太大的区别，问题在于，如果抗体识别的表位和该蛋白质与DNA结合的部位一致，则会导致CHIP实验的失败。
03:IF/IHC
免疫荧光和免疫组化中需要进行固定一步，固定是为了尽量让细胞的形态结构维持和原有的一致。这种化学物质的固定使蛋白质变性凝固，与天然状态下的蛋白质有了一定的区别，但是又不同WB中加热变性变成了线性的结构。因此在做IF/IHC实验中，合适的抗体可以是纯化的重组蛋白得到的抗体，也可以是人工合成多肽得到的抗体（多肽是在蛋白质的表面）。
04:FC
流式细胞中分为两种，一种是活细胞的流式，这种流失采用是天然蛋白或者重组蛋白的抗体来做，另外一种是经过固定之后的流式，和IF/IHC 所用抗体一致。在做流式细胞中，我们有直接标记和间接标记，间接标记不如直接标记真实准确。因此我们选择流式抗体要采用带有荧光标记的抗体；如果研究的蛋白没有直接标记的抗体，那么就采用间接标记抗体，需要添加荧光二抗。
二、确定实验样本种属
一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种动物或人的标本，如：可以用于rat、mouse、human、pig、goat等动物的标本的实验。也就是说应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高。
如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过。为了避免实验风险，尽量不要使用说明书中没有提及的标本的种属的抗体。或者通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy和NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。如果比对结果，证明同源性比较高的，也可以选择。将抗体的免疫原序列与想检测的物种的蛋白序列进行比对，如果重合比对结果重复度大于85%，那么两者可能会发生交叉反应效应（即使是比对得分大于85%，也无法完全保证抗体一定会识别）需要使用多个对照来确定该抗体是否与靶标特异地结合。
三、分析样本中的蛋白质的结构性质
了解样本蛋白的结构性质有助于选择合适的抗体，至少需要考虑两方面因素：
1、待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
2、样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。
四、抗体宿主的选择
一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，**好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa的重链和轻链条带。
